近年來,拉曼光譜作為一種多用途的生物醫(yī)學(xué)和生物分析方法受到了廣泛的關(guān)注。拉曼光譜以無標(biāo)簽的方式提供分子信息,幾乎不需要樣品制備。相對(duì)于其他方法,拉曼光譜應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷中具有非破壞性、測(cè)量迅速、測(cè)量精確、易與其他測(cè)量方法結(jié)合和高度自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。拉曼光譜或?qū)⒊蔀獒t(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究的理想工具。
由于使用可見光激光會(huì)導(dǎo)致熒光效應(yīng)的高強(qiáng)度干擾,減少熒光影響最好的方式就是使用非可見光波段的激發(fā)光,如,高于700nm的近紅外光或者低于300nm的紫外光。對(duì)生物樣品來說,紫外光會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞變異以及DNA的損壞,所以生物拉曼激發(fā)光首選為近紅外光。因此一般近紅外波段為生物拉曼光譜的理想檢測(cè)波段。
而近紅外波段恰好是傳統(tǒng)基于硅的CCD探測(cè)器的探測(cè)上限,傳統(tǒng)CCD探測(cè)器在近紅外波段的量子效應(yīng)效率較低,不利于生物拉曼光譜的探測(cè)。InGaAs 相機(jī)在近紅外波段具有就較高的量子響應(yīng),但是InGaAs相機(jī)的暗電流遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CCD相機(jī)的暗電流,目前還不能夠達(dá)到能夠滿足拉曼光譜應(yīng)用的噪聲水平,信噪比會(huì)降低。
Blaze相機(jī)具有新型的HR傳感器,使其具有傳統(tǒng)CCD相機(jī)暗電流低的特點(diǎn)的同時(shí),在近紅外波段具有很高的量子響應(yīng)效率,是探測(cè)生物拉曼光譜的理想工具。
下圖為激發(fā)波長(zhǎng)為785nm時(shí),分別通過傳統(tǒng)CCD相機(jī)和Blaze相機(jī)測(cè)得的拉曼光譜(數(shù)據(jù)由范德堡大學(xué)Anita Mahadevan-Jansen教授提供)。可以看出,與傳統(tǒng)CCD相機(jī)相比,Blaze相機(jī)對(duì)生物樣品的拉曼光譜具有更高的靈敏度。
此外,生物拉曼光譜一般需要與顯微鏡聯(lián)合使用,因此,需要提高生物拉曼光譜系統(tǒng)中光譜儀的成像能力。
下圖為分別通過傳統(tǒng)光譜儀和IsoPlane光譜儀得到的圖像,可以看到IsoPlane光譜儀得到的圖像(左圖)更加清晰,成像能力更強(qiáng)。
IsoPlane光譜儀通過增加斯密特糾正鏡,消除了像差的影響,各個(gè)通道之間可以被完全的區(qū)分開。但是傳統(tǒng)的光譜儀由于存在像差,各個(gè)通道在邊緣部分混合在一起,無法進(jìn)行區(qū)分。因此,IsoPlane光譜儀具有更好的成像能力。
審核編輯 黃宇
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