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蠟梅花cDNA文庫構建及其高頻出現脂轉移蛋白cDNA的表達
摘要：【目的】構建蠟梅花cDNA 文庫，分析蠟梅脂轉移蛋白基因的表達，為探索蠟梅冬季開花分子機理，分離克隆特色基因奠定基礎。【方法】以蠟梅花器官為材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 構建文庫，RT-PCR 分析基因表達。【結果】經測定原始文庫滴度達到1.4×106 pfu/ml，擴增總文庫滴度約為1010pfu/ml，重組率達到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均約1.1 kb，通過PCR 檢測，從總文庫中檢測到了表達豐度不同的蠟梅PI、AP3 和LTP 基因的特異片段，說明所構建的文庫覆蓋度高、代表性強，LTP 基因具有內含子，而總文庫中擴增出的LTP 基因不含內含子，說明所構建的cDNA 文庫無基因組DNA 污染， LTP 基因在蠟梅開花各個時期均表現較高的轉錄水平，與EST 分析時高頻率出現LTP 序列的情況相符，證實所構建的文庫能夠反映蠟梅開花過程基因表達的基本情況。【結論】已獲得高質量的蠟梅花cDNA 文庫，可以用于進一步的基因克隆或EST 測序分析，這是首次正式報道蠟梅cDNA 文庫的構建。LTP 基因在蠟梅開花過程中可能具有重要的生物學功能，為探索蠟梅冬季開花分子機理提供了線索。
關鍵詞：蠟梅；cDNA 文庫；脂轉移蛋白基因；RT-PCR
摘要：【目的】構建蠟梅花cDNA 文庫，分析蠟梅脂轉移蛋白基因的表達，為探索蠟梅冬季開花分子機理，分離克隆特色基因奠定基礎。【方法】以蠟梅花器官為材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 構建文庫，RT-PCR 分析基因表達。【結果】經測定原始文庫滴度達到1.4×106 pfu/ml，擴增總文庫滴度約為1010pfu/ml，重組率達到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均約1.1 kb，通過PCR 檢測，從總文庫中檢測到了表達豐度不同的蠟梅PI、AP3 和LTP 基因的特異片段，說明所構建的文庫覆蓋度高、代表性強，LTP 基因具有內含子，而總文庫中擴增出的LTP 基因不含內含子，說明所構建的cDNA 文庫無基因組DNA 污染， LTP 基因在蠟梅開花各個時期均表現較高的轉錄水平，與EST 分析時高頻率出現LTP 序列的情況相符，證實所構建的文庫能夠反映蠟梅開花過程基因表達的基本情況。【結論】已獲得高質量的蠟梅花cDNA 文庫，可以用于進一步的基因克隆或EST 測序分析，這是首次正式報道蠟梅cDNA 文庫的構建。LTP 基因在蠟梅開花過程中可能具有重要的生物學功能，為探索蠟梅冬季開花分子機理提供了線索。
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